病毒感染活体成像
参考步骤：
- 实验用小鼠接受皮内或静脉注射的假病毒进行感染。
- 在指定时间后，将实验小鼠用异氟烷气体麻醉或用戊巴比妥钠（40 mg/kg体重）腹腔注射麻醉。
- 小鼠麻醉后腹腔注射发光底物D-荧光素（参考剂量50mg/kg 体重）
- 约10分钟后，将实验小鼠置入活体成像系统采集成像。
具体步骤说明：
Step1:假病毒制备。选择HEK293T细胞，铺板至70-80%汇合度。采用Lipofectamine 3000共转染以下质粒：包膜蛋白质粒（SARS-CoV-2 S、VSV-G等），假病毒核心质粒（HIV-1、VSV），报告基因质粒（Luciferase或GFP），37℃，5% CO2培养48小时。
Step2:假病毒收获。收集培养基，过滤（0.45uM滤膜）。超速离心（20000g，2h）浓缩病毒。-80℃冻存，备用。
Step3:活体成像实验（小鼠模型）。选用人ACE2转基因小鼠（hACE2小鼠）或野生型BALB/c小鼠。适应性饲养1周，控制体重一致。
Step4:假病毒感染。静脉注射（模拟全身感染）。通过尾静脉注射100-200uL假病毒悬液。
Step5:活体成像检测。10-15分钟前，腹腔注射D-Luciferin（150 mg/kg）。置于活体成像系统，设定适当曝光时间，实时记录感染动态。
参考方法示例及文献来源：
1.Nie J, Liu L, Wang Q, Chen R, Ning T, Liu Q, Huang W, Wang Y. Nipah pseudovirus system enables evaluation of vaccines in vitro and in vivo using non-BSL-4 facilities. Emerg Microbes Infect. 2019;8(1):272-281. doi: 10.1080/22221751.2019.1571871
2.Nie J, Wu X, Ma J, Cao S, Huang W, Liu Q, Li X, Li Y, Wang Y. Development of in vitro and in vivo rabies virus neutralization assays based on a high-titer pseudovirus system. Sci Rep. 2017 Feb 20;7:42769. doi: 10.1038/srep42769
3.Liu Q, Fan C, Zhou S, Guo Y, Zuo Q, Ma J, Liu S, Wu X, Peng Z, Fan T, Guo C, Shen Y, Huang W, Li B, He Z, Wang Y. Bioluminescent imaging of vaccinia virus infection in immunocompetent and immunodeficient rats as a model for human smallpox. Sci Rep. 2015 Aug 3;5:11397. doi: 10.1038/srep11397