抗体ADCC活性评价
参考步骤：
- 将目标靶细胞与带有Fluc的假病毒在细胞培养板中混合预先混合孵育数小时。
- 洗涤并离心除去残余的死细胞及未感染的病毒获得靶细胞。
- 加入单克隆抗体并梯度稀释。
- 向孔内加入已计数的检测细胞孵育培养数小时，检测细胞识别单克隆抗体结合的靶细胞后被激活，表达Fluc。
- 通过发光检测测定单克隆抗体的ADCC活性。
具体步骤说明：
Step1:假病毒制备。选择HEK293T细胞，铺板至70-80%汇合度。采用Lipofectamine 3000共转染以下质粒：包膜蛋白质粒（SARS-CoV-2 S、VSV-G等），假病毒核心质粒（HIV-1、VSV），报告基因质粒（Luciferase或GFP），37℃，5% CO2培养48小时。
Step2:靶细胞感染。每孔加入1-2×104靶细胞（如 HEK293T-hACE2）。37℃过夜培养。
Step3:假病毒感染，加入适量假病毒（如100 TCID50）。37℃孵育24-48小时。
Step4:加入抗体。感染细胞用不同比例的ADCC抗体（0.1-10 µg/mL）孵育1小时。
Step5:加入效应细胞。取NK细胞（或其他效应细胞），调整浓度至 2-5×105/mL。每孔加入100 µL NK细胞细胞。37℃孵育4-6小时。
Step6：荧光素酶检测。加入荧光素酶底物100 µL。孵育5-10分钟，使用微孔板读数仪 测定RLU（相对荧光单位）。
参考方法示例及文献来源：
1. Liu, Q., Fan, C., Li, Q. et al. Antibody-dependent-cellular-cytotoxicity-inducing antibodies significantly affect the post-exposure treatment of Ebola virus infection. Sci Rep 7, 45552 (2017). https://doi.org/10.1038/srep45552