抗体中和活性评价
参考步骤：
- 将梯度稀释的抗体与假病毒在细胞培养条件下混合孵育60分钟。
- 将抗体与假病毒的混合液加入提前铺好的细胞培养板中，培养24或48小时。
- 通过荧光素酶发光底物检测发光值评价抗体中和活性。
Step1:假病毒制备。选择HEK293T细胞，铺板至70-80%汇合度。采用Lipofectamine 3000共转染以下质粒：包膜蛋白质粒（SARS-CoV-2 S、VSV-G等），假病毒核心质粒（HIV-1、VSV），报告基因质粒（Luciferase或GFP），37℃，5% CO2培养48小时。
2靶细胞铺板。在96孔板中加入1×104细胞/孔（HEK293T-hACE2或Vero E6）。37℃，5% CO2培养24小时。
3预混抗体与假病毒。抗体或血清梯度稀释：用 3-5 倍稀释，终浓度范围10μg/mL - 0.01 μg/mL（单克隆抗体）。血清中和实验采用 1:10, 1:20, 1:40……1:2560 稀释。每孔加入等体积假病毒（100-200 TCID50）。37℃孵育1h，使抗体与病毒充分结合。
4细胞感染。将抗体-假病毒混合物加入靶细胞（96孔板）。37℃，5% CO2培养 24-48 小时。
5荧光素酶检测。弃培养基，PBS 清洗细胞一次。加入荧光素酶裂解液（50-100μL）。室温孵育10分钟，使用微孔板读数仪读取相对荧光单位（RLU）。
参考方法示例及文献来源：
1. Cao Y, Wang J, Jian F, Xiao T, Song W, Yisimayi A, Huang W, Li Q, Wang P, An R, Wang J, Wang Y, Niu X, Yang S, Liang H, Sun H, Li T, Yu Y, Cui Q, Liu S, Yang X, Du S, Zhang Z, Hao X, Shao F, Jin R, Wang X, Xiao J, Wang Y, Xie XS. Omicron escapes the majority of existing SARS-CoV-2 neutralizing antibodies. Nature. 2022 Feb;602(7898):657-663. doi: 10.1038/s41586-021-04385-3
2. Li Q, Wu J, Nie J, Zhang L, Hao H, Liu S, Zhao C, Zhang Q, Liu H, Nie L, Qin H, Wang M, Lu Q, Li X, Sun Q, Liu J, Zhang L, Li X, Huang W, Wang Y. The Impact of Mutations in SARS-CoV-2 Spike on Viral Infectivity and Antigenicity. Cell. 2020 Sep 3;182(5):1284-1294.e9. doi: 10.1016/j.cell.2020.07.012
3. Li Q, Liu Q, Huang W, Li X, Wang Y. Current status on the development of pseudoviruses for enveloped viruses. Rev Med Virol. 2018 Jan;28(1):e1963. doi: 10.1002/rmv.1963