疫苗中和活性评价
参考步骤：
- 候选疫苗接种动物后采血并离心得到血清。
- 将梯度稀释的血清与假病毒在细胞培养条件下混合孵育60分钟。
- 将混合后的单克隆抗体加入提前铺好的细胞培养板中，设置细胞对照及病毒对照组并培养24或48小时。
- 通过荧光素酶发光底物检测发光值评价血清的疫苗中和活性。
具体步骤说明：
Step1:假病毒制备。选择HEK293T细胞，铺板至70-80%汇合度。采用Lipofectamine 3000共转染以下质粒：包膜蛋白质粒（SARS-CoV-2 S、VSV-G等），假病毒核心质粒（HIV-1、VSV），报告基因质粒（Luciferase或GFP），37℃，5% CO2培养48小时。
Step2：假病毒中和试验。96 孔板铺1×104细胞/孔（HEK293T-hACE2或Vero E6）。37℃，5% CO2培养24小时。
Step3：预混疫苗血清与假病毒。血清梯度稀释（使用DMEM+10% FBS稀释）。加入等体积假病毒（100-200 TCID50）。37℃孵育1 h。
Step4：使血清抗体与病毒结合。将血清-假病毒混合物加入靶细胞（96 孔板）。37℃，5% CO2培养24-48小时。
Step5：荧光素酶检测。弃培养基，PBS清洗细胞一次。加入荧光素酶裂解液（50-100μL）。室温孵育10分钟，使用微孔板读数仪读取相对荧光单位（RLU）。
参考方法示例及文献来源：
1. Zhong J, Liu S, Cui T, Li J, Zhu F, Zhong N, Huang W, Zhao Z, Wang Z. Heterologous booster with inhaled adenovirus vector COVID-19 vaccine generated more neutralizing antibodies against different SARS-CoV-2 variants. Emerg Microbes Infect. 2022 Dec;11(1):2689-2697. doi: 10.1080/22221751.2022.2132881
2. Li Q, Nie J, Wu J, Zhang L, Ding R, Wang H, Zhang Y, Li T, Liu S, Zhang M, Zhao C, Liu H, Nie L, Qin H, Wang M, Lu Q, Li X, Liu J, Liang H, Shi Y, Shen Y, Xie L, Zhang L, Qu X, Xu W, Huang W, Wang Y. SARS-CoV-2 501Y.V2 variants lack higher infectivity but do have immune escape. Cell. 2021 Apr 29;184(9):2362-2371.e9. doi: 10.1016/j.cell.2021.02.042
3. Cruz-Cardenas, J.A., Gutierrez, M., López-Arredondo, A. et al. A pseudovirus-based platform to measure neutralizing antibodies in Mexico using SARS-CoV-2 as proof-of-concept. Sci Rep 12, 17966 (2022).