发明名称：假病毒包装系统及其用途
摘要
本发明涉及基因工程和分子生物学领域，具体涉及假病毒包装载体及包装系统，所述假病毒包装载体及包装系统用于制备假病毒的用途，以及假病毒的制备方法。本发明的假病毒包装系统能够高效、便利地制备假病毒，为病毒的研究和疫苗的制备等提供了有力的工具。
权利要求
1.一种假病毒包装载体，其是在载体pSG3.Δenv中可操作地连接 有荧光素酶基因和调节该基因转录的启动子。
2.权利要求1的假病毒包装载体，其是在载体pSG3.Δenv中nef 基因的上游可操作地连接有荧光素酶基因和调节该基因转录的启动子。
3.权利要求1或2的假病毒包装载体，其中所述的荧光素酶选自 萤火虫荧光素酶、海肾荧光素酶，优选地，所述萤火虫荧光素酶基因 的序列如SEQ ID NO：3所示。
4.权利要求1或2的假病毒包装载体，其中所述的启动子为CMV 启动子，优选地，所述CMV启动子的序列如SEQ ID NO：18所示。
5.权利要求1-4任一项的假病毒包装载体，其中所述荧光素酶基 因和调节该基因转录的启动子的序列如SEQ ID NO：6所示，优选地， 所述假病毒包装载体具有SEQ ID NO：7所示的序列。
6.一种假病毒包装系统，其包含权利要求1-5任一项的假病毒包 装载体和至少一种真核表达载体。
7.权利要求6的假病毒包装系统，其中所述的真核表达载体是将 载体pcDNA3.1(+)中CMV启动子至T7启动子的序列替换为CAG启 动子、LTR启动子或包含有人巨细胞病毒主要即刻早期蛋白基因 (Human cytomegalovirus major immediate-early protein gene)增强子/ 启动子、人巨细胞病毒主要即刻早期蛋白基因外显子1和人巨细胞病 毒主要即刻早期蛋白基因内含子1的序列。
8.权利要求7的假病毒包装系统，其中所述的包含有人巨细胞病 毒主要即刻早期蛋白基因(Human cytomegalovirus major immediate-early protein gene)增强子/启动子、人巨细胞病毒主要即刻早 期蛋白基因外显子1和人巨细胞病毒主要即刻早期蛋白基因内含子1的 序列如SEQ ID NO：16所示，优选地，所述真核表达载体具有如SEQ ID NO：17所示的序列。
9.权利要求6-8任一项的假病毒包装系统，其中所述的真核表达 载体还含有外源基因，优选地，所述外源基因为病毒的膜蛋白基因； 优选地，所述病毒为有包膜病毒，进一步优选地，所述有包膜病毒包 括DNA病毒、RNA病毒和逆转录病毒，例如选自冠状病毒(例如 SARS-CoV)，疱疹病毒，痘病毒，嗜肝病毒(如丙肝病毒)，丝状病 毒(如Ebola病毒)，弹状病毒(例如狂犬病毒)，流感病毒，副粘病 毒(如麻疹病毒、呼吸道合胞病毒)，黄病毒(例如登革病毒)，囊膜 病毒，布尼亚病毒，逆转录病毒。
10.真核表达载体，其是将载体pcDNA3.1(+)中CMV启动子至T7 启动子的序列替换为CAG启动子、LTR启动子或包含有人巨细胞病毒 主要即刻早期蛋白基因(Human cytomegalovirus major immediate-early protein gene)增强子/启动子、人巨细胞病毒主要即刻早 期蛋白基因外显子1和人巨细胞病毒主要即刻早期蛋白基因内含子1的 序列。
11.权利要求10的真核表达载体，其中所述的包含有人巨细胞病毒 主要即刻早期蛋白基因(Human cytomegalovirus major immediate-early protein gene)增强子/启动子、人巨细胞病毒主要即刻早 期蛋白基因外显子1和人巨细胞病毒主要即刻早期蛋白基因内含子1的 序列如SEQ ID NO：16所示，优选地，所述真核表达载体具有如SEQ ID NO：17所示的序列。
12.权利要求11的真核表达载体，其还含有外源基因，优选地， 所述外源基因为病毒的膜蛋白基因；优选地，所述病毒为有包膜病毒， 进一步优选地，所述有包膜病毒包括DNA病毒、RNA病毒和逆转录病 毒，例如选自冠状病毒(例如SARS-CoV)，疱疹病毒，痘病毒，嗜肝 病毒(如、丙肝病毒)，丝状病毒(如Ebola病毒)，弹状病毒(例如 狂犬病毒)，流感病毒，副粘病毒(如麻疹病毒、呼吸道合胞病毒)， 黄病毒(例如登革病毒)，囊膜病毒，布尼亚病毒，逆转录病毒。
13.宿主细胞，其含有权利要求1-5任一项的假病毒包装载体、权利 要求6-9任一项的假病毒包装系统或权利要求10-12任一项的真核表达载 体；优选地，所述细胞选自HEK293、HEK293T、HEK293FT细胞。
14.假病毒，其由权利要求1-5任一项的假病毒包装载体、权利要 求6-9任一项的假病毒包装系统、权利要求10-12任一项的真核表达载体 或权利要求13的宿主细胞制备得到。
15.权利要求1-5任一项的假病毒包装载体、权利要求6-9任一项的 假病毒包装系统、权利要求10-12任一项的真核表达载体或权利要求13 的宿主细胞在制备假病毒中的用途。
16.权利要求15的用途，其中所述的假病毒为有包膜病毒的假病毒， 优选地，所述有包膜病毒包括DNA病毒、RNA病毒和逆转录病毒，例 如选自冠状病毒(例如SARS-CoV)，疱疹病毒，痘病毒，嗜肝病毒(如 丙肝病毒)，丝状病毒(如Ebola病毒)，弹状病毒(例如狂犬病毒)， 流感病毒，副粘病毒(如麻疹病毒、呼吸道合胞病毒)，黄病毒(例如 登革病毒)，囊膜病毒，布尼亚病毒，逆转录病毒。
17.一种假病毒的制备方法，其包括以下步骤：
将权利要求1-5任一项的假病毒包装载体和权利要求10-12任一项的 真核表达载体共转染真核细胞，收集细胞培养上清，即得到假病毒。