发明名称:HPV假病毒和其试剂盒以及检测HPV中和抗体的方法
摘要
本发明涉及免疫学领域,更具体地涉及一种HPV假病毒、含有所述HPV假病毒的试剂盒及利用其检测HPV中和抗体的方法。
权利要求
1.一种假病毒,其包含HPV衣壳蛋白和编码Gluc蛋白的基因。
2.权利要求1的假病毒,其中所述HPV衣壳蛋白是HPV16、HPV18、 HPV6、HPV11、HPV52或HPV58的衣壳蛋白。
3.权利要求1或2的假病毒,其中所述编码Gluc蛋白的基因被插入 表达载体中形成重组表达载体,并且所述基因的核苷酸序列与所述表达 载体的表达控制序列可操作地连接;优选地,所述表达载体为真核细胞 表达载体;更优选地,所述重组表达载体如图10所示。
4.一种血清中和抗体的检测方法,包括:
(1)将权利要求1到3中任一项的假病毒和待测血清共孵育后, 加入受体细胞中共培养;
(2)吸取一定量的共培养上清,加入化学发光检测试剂;
(3)进行化学发光检测;以及
(4)依据所测得的化学发光检测值计算待测血清的中和抗体滴度。
5.权利要求4的方法,包括:
(1)将权利要求1到3中任一项的假病毒和待测血清共孵育后, 加入等体积的真核细胞培养物中共培养;
(2)吸取一定量的共培养上清,加入1/10体积的化学发光检测试 剂;
(3)用化学发光检测仪进行化学发光检测;
(4)依据测得的化学发光检测值计算感染抑制率;
(5)将所测得感染抑制率大于50%的待测血清样本稀释后再次进 行检测;以及
(6)以感染抑制率大于50%的最高血清稀释倍数作为待测血清的 中和抗体滴度。
6.权利要求5的方法,其中所述化学发光检测试剂为
Gluc Substrate、所述化学发光检测仪为GloMax化学发光检测仪。
Gluc Substrate、所述化学发光检测仪为GloMax化学发光检测仪。7.权利要求4到6中任一项的方法,其中所述真核细胞培养物中真 核细胞的浓度为75-600个细胞/μl;优选地,所述真核细胞培养物中真 核细胞的浓度为300个细胞/μl;优选地,所述真核细胞为293TT或 293FT细胞。
8.一种试剂盒,其含有权利要求1到3中任一项的假病毒。
9.权利要求8的试剂盒,其还含有化学发光检测试剂和真核细胞;
优选地,所述化学发光检测试剂为
Gluc Substrate;
Gluc Substrate;优选地,所述真核细胞为293TT或293FT细胞。
10.权利要求1到3中任一项的假病毒、权利要求8或9的试剂盒用 于检测血清中HPV病毒中和抗体的用途;
优选地,所述血清为家兔血清、人血清或小鼠血清;
优选地,所述HPV病毒为HPV16、HPV18、HPV6、HPV11、HPV52 或HPV58病毒。