抗病毒药物筛选
参考步骤：
- 将所需细胞消化计数后铺板。
- 预先将假病毒与病毒抑制剂混合孵育，或者将已铺板的细胞与抗病毒药物预先孵育。
- 将假病毒加入细胞培养板中混合培养48h。
- 弃去培养板中液体，加入荧光素酶检测试剂反应2-3分钟后测定发光值。
具体步骤说明：
Step1:假病毒制备。选择HEK293T细胞，铺板至70-80%汇合度。采用Lipofectamine 3000共转染以下质粒：包膜蛋白质粒（SARS-CoV-2 S、VSV-G等），假病毒核心质粒（HIV-1、VSV），报告基因质粒（Luciferase或GFP），37℃，5% CO2培养48小时。
Step2: 体外抗病毒药物筛选。96孔板中接种Vero E6、Huh7或HEK293T-hACE2细胞，每孔1×104细胞，37℃孵育12-24 h。加入不同浓度的抗病毒药物（如10µM、1µM、0.1µM），孵育1-2 h。
Step3:取适量假病毒（如100 TCID50），加入含药培养基中。37℃孵育24-48h。
Step4:感染抑制评估。终止培养后，加入荧光素酶检测试剂（100 µL）。使用微孔板读数仪测定相对荧光单位（RLU）。
参考方法示例及文献来源：
1. Zhu Y, Yu D, Yan H, Chong H, He Y. 2020. Design of Potent Membrane Fusion Inhibitors against SARS-CoV-2, an Emerging Coronavirus with High Fusogenic Activity. J Virol 94:10.1128/jvi.00635-20
2. Gentile D, Chiummiento L, Santarsiere A, Funicello M, Lupattelli P, Rescifina A, Venuti A, Piperno A, Sciortino MT, Pennisi R. Targeting Viral and Cellular Cysteine Proteases for Treatment of New Variants of SARS-CoV-2. Viruses. 2024 Feb 22;16(3):338. doi: 10.3390/v16030338
3. Yang L, Pei RJ, Li H, Ma XN, Zhou Y, Zhu FH, He PL, Tang W, Zhang YC, Xiong J, Xiao SQ, Tong XK, Zhang B, Zuo JP. Identification of SARS-CoV-2 entry inhibitors among already approved drugs. Acta Pharmacol Sin. 2021 Aug;42(8):1347-1353. doi: 10.1038/s41401-020-00556-6