发明名称：感染动物的假型MERS-CoV病毒、其制备方法和用途
摘要
本发明涉及假型MERS‑CoV病毒包装系统、使用所述假型MERS‑CoV病毒包装系统体外转染细胞来制备假型MERS‑CoV病毒的方法，并涉及在缺乏生物安全水平三级(BSL‑3)设施的生物实验室中使用所述假型MERS‑CoV病毒感染人二肽基肽酶4(hDPP4)基因敲入的小鼠模型，由此评估抗病毒剂和疫苗的体内功效。
权利要求
1.假型MERS-CoV病毒包装系统，其包含包膜基因缺失的HIV骨架质粒和含有MERS- Spike蛋白基因的表达质粒，所述包装系统共转染哺乳动物细胞(例如，HEK293细胞、HEK 293T细胞、HEK293FT细胞)后能够包装出高滴度的假型MERS-CoV病毒，例如滴度高达1× 105－1×109TCID50/ml，例如1×107－1×109TCID50/ml，例如，1.27×107.5TCID50/ml的假型 MERS-CoV病毒。
2.权利要求1所述的假型MERS-CoV病毒包装系统，其中共转染哺乳动物细胞(例如， HEK293细胞、HEK 293T细胞、HEK293FT细胞)时使用的包膜基因缺失的HIV骨架质粒与含有 MERS-Spike蛋白基因的表达质粒的比率为1:3至4:1，优选地为3:1；优选地，其中假型MERS- CoV病毒包装系统包含一种选自pSG3.Δenv.Fluc、pSG3.Δenv.Fluc.Δnef、pSG3.Δ env.cmvFluc和NTL-3.Fluc.R-.E-的包膜基因缺失的HIV骨架质粒，并包含一种选自pCAG- MERS、pcDNA-MERS、pCMV-MERS和pcDNA-opti-MERS的MERS-Spike蛋白编码序列表达质粒。
3.假型MERS-CoV病毒，其中MERS-CoV S蛋白有效地掺入包装的HIV颗粒(例如，HIV-1颗 粒)中，所述假病毒是使用权利要求1或2所述的假型MERS-CoV病毒包装系统共转染哺乳动 物细胞(例如，HEK293细胞、HEK 293T细胞、HEK293FT细胞)后获得的。
4.宿主细胞，其包含权利要求1或2所述的假型MERS-CoV病毒包装系统，所述宿主细胞 经培养后能够生产权利要求3所述的假型MERS-CoV病毒。
5.权利要求1或2所述的假型MERS-CoV病毒包装系统、权利要求4所述的宿主细胞的用 途，用于制备权利要求3所述的假型MERS-CoV病毒。
6.权利要求3所述的假型MERS-CoV病毒的制备方法，包括将权利要求1或2所述的假型 MERS-CoV病毒包装系统共转染哺乳动物细胞(例如，HEK293细胞、HEK 293T细胞、HEK293FT 细胞)，培养并收获细胞培养上清液，获得在上清液中的假型MERS-CoV病毒。
7.权利要求3所述的假型MERS-CoV病毒的用途，用于有效感染人二肽基肽酶4(hDPP4) 基因敲入小鼠，以获得假型MERS-CoV病毒感染的hDPP4基因敲入小鼠(例如R26-hDPP4小鼠) 模型。
8.权利要求7所述的假型MERS-CoV病毒的用途，其中所获得的假型MERS-CoV病毒感染 的hDPP4基因敲入小鼠模型能够用于在缺乏BSL-3设施的生物实验室(例如，在BSL-2设施) 中评估抗病毒剂和疫苗的体内功效，例如，评估抗病毒剂和疫苗的体内预防性和/或治疗性 功效，包括通过评估hDPP4基因敲入小鼠的假型MERS-CoV病毒载量、通过Q-PCR、BLI检测、组 织病理学评分、和/或通过免疫组织化学分析来确定抗病毒剂和疫苗的体内功效。
9.权利要求7所述的假型MERS-CoV病毒的用途，其中所获得的假型MERS-CoV病毒感染 的hDPP4基因敲入小鼠模型中，使用的假型MERS-CoV病毒量与感染R26-hDPP4小鼠的MERS- CoV真病毒量之间能够进行感染剂量的定量转换，例如，假型MERS-CoV病毒的1TCID50对应于 10－3PFU－10－4PFU的真病毒，例如，假型MERS-CoV病毒的1TCID50对应于0.0046PFU的真病 毒。
10.筛选和/或检测MERS-CoV的抗病毒剂和疫苗的方法，包括对假型MERS-CoV病毒和/ 或MERS-CoV真病毒感染前/后的R26-hDPP4小鼠，施用抗病毒剂和疫苗，以及评估抗病毒剂 和疫苗的体内预防性和/或治疗性功效，包括通过评估hDPP4基因敲入小鼠的假型MERS-CoV 病毒载量和/或MERS-CoV真病毒载量、通过Q-PCR、BLI检测、组织病理学评分、和/或通过免 疫组织化学分析来确定抗病毒剂和疫苗的体内功效，由此筛选和/或检测MERS-CoV的抗病 毒剂和疫苗。