发明名称：一种检测SARS-CoV-2抗体中和活性的方法
摘要
本申请涉及生物技术领域，具体涉及一种SARS‑CoV‑2类病毒颗粒的制备方法，以及根据所述方法制备的SARS‑CoV‑2类病毒颗粒。本申请还涉及一种筛选抗SARS‑CoV‑2抗体或者检测SARS‑CoV‑2抗体中和活性的方法，以及一种筛选能够抑制SARS‑CoV‑2感染细胞的候选药物的方法。
权利要求
1.一种SARS-CoV-2类病毒颗粒的制备方法，所述方法包括：
(i)将vTF7-3痘病毒感染第一宿主细胞，然后将prVSVΔG-GFP骨架质粒和辅助质粒转染所述第一宿主细胞；
(ii)收获步骤(i)获得的VSV类病毒颗粒；
(iii)将膜质粒转染所述第二宿主细胞，所述膜质粒含有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；然后将MOI值为0.02至0.04(例如，0.02，0.03，0.04)的VSV类病毒颗粒感染第二宿主细胞，以获得SARS-CoV-2类病毒颗粒。
2.权利要求1所述的方法，所述方法具有选自下列的一项或多项特征：
(1)所述第一宿主细胞和第二宿主细胞相同不相同；
(2)所述第一宿主细胞和第二宿主细胞各自独立地选自人的造血细胞，上皮细胞，肝细胞，肿瘤细胞或神经细胞；
(3)所述第一宿主细胞为BHK21细胞，第二宿主细胞为293T细胞；
(4)在步骤(i)中，vTF7-3痘病毒的MOI值为4至6(例如，4，5，6)；
(5)在步骤(i)中，辅助质粒包括pBS-N，pBS-P，pBS-G和pBS-L；
(6)所述膜质粒是将如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列插入pcDNA3.1载体，并根据宿主细胞进行密码子优化所获得的；
(7)将所述骨架质粒和辅助质粒通过瞬时转染或稳定转染至第一宿主细胞中；
(8)将所述膜质粒通过瞬时转染或稳定转染至第二宿主细胞中。
3.一种SARS-CoV-2类病毒颗粒，其是通过权利要求1或2所述的方法制备获得的。
4.一种筛选抗SARS-CoV-2抗体或者检测SARS-CoV-2抗体中和活性的方法，所述方法包括，在将权利要求3所述的SARS-CoV-2类病毒颗粒与宿主细胞接触之前、同时或之后，将所述宿主细胞与所述抗体接触；
优选地，方法包括：
步骤(1)：将权利要求3所述的SARS-CoV-2类病毒颗粒与宿主细胞接触，然后，将所述宿主细胞与所述抗体接触；
步骤(2)：在能够发出荧光的条件下，观察所述宿主细胞，以判断所述抗体是否是抗SARS-CoV-2的抗体；或者，在免疫斑点读板仪中对所述宿主细胞的阳性细胞数进行计数，并计算ID50值，以检测抗体的中和活性。
5.一种筛选能够抑制SARS-CoV-2感染细胞的候选药物的方法，所述方法包括，在将权利要求3所述的SARS-CoV-2类病毒颗粒与宿主细胞接触之前、同时或之后，将所述类病毒颗粒或宿主细胞与所述候选药物接触；
优选地，方法包括：
步骤(1)：将权利要求3所述的SARS-CoV-2类病毒颗粒与宿主细胞接触，然后，将所述宿主细胞与所述抗体接触；
步骤(2)：在能够发出荧光的条件下，观察所述宿主细胞，以判断所述候选药物能否抑制SARS-CoV-2感染细胞。
6.权利要求4或5所述的方法，其中，所述宿主细胞为人的细胞，例如，造血细胞，上皮细胞，肝细胞，肿瘤细胞，神经细胞；
优选地，所述宿主细胞为表达ACE2的细胞，例如，293T-ACE2细胞和/或AF细胞；
优选地，所述细胞为表达ACE2和Furin的细胞，例如，AF细胞。
7.权利要求4-6任一项所述的方法，其中，在步骤(1)中，将权利要求3所述的SARS-CoV-2类病毒颗粒与宿主细胞接触24h-36h(例如，24h，26h，28h，30h，32h，34h，36h)。
8.权利要求4-7任一项所述的方法，其中，将权利要求3所述的SARS-CoV-2类病毒颗粒与2.00x103细胞/孔至4.00x103细胞/孔(例如，2.00x103细胞/孔，3.00x103细胞/孔，4.00x103细胞/孔)的宿主细胞接触。
9.权利要求4-8任一项所述的方法，其中，将所述宿主细胞与所述抗体接触0.5h-2h(例如，0.5h，1h，2h)。
10.权利要求5-9任一项所述的方法，其中，将MOI的值为0.2的权利要求3所述的SARS-CoV-2类病毒颗粒与宿主细胞接触。
11.权利要求4-10任一项所述的方法，其中，所述方法的步骤(1)和(2)通过下述步骤(a)至步骤(d)进行：
步骤(a)：在96孔板中进行抗体的梯度稀释，稀释后将所述抗体转移至384孔板中，每孔加入10ul所述抗体；
步骤(b)：用DMEM完全培养基将权利要求3所述的SARS-CoV-2类病毒颗粒稀释至每孔约400个GFP阳性颗粒数，每孔加10μl所述类病毒颗粒，孵育1h；
优选地，将所述384孔板置于37℃5％CO2孵箱中孵育1h；
步骤(c)：将表达ACE2和Furin的细胞(例如，AF细胞)浓度调整为4x105个/ml悬液，每孔加入20ul所述细胞，即每孔细胞加入量为2x103个，孵育24h；
优选地，将所述384孔板置于37℃5％CO2孵箱中孵育24h；
步骤(d)：在免疫斑点读板仪Biotek对GFP阳性的所述细胞数进行计数，并使用Reed-Muench方法计算ID50值，以评估样本的中和抗体水平。