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发明名称：一种HPV中和抗体的高通量检测方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种HPV中和抗体的高通量检测方法。本发明建立了一种基于HPV假病毒的中和抗体的高通量检测方法，该方法首次使用384孔板进行假病毒中和试验，并对靶细胞加入量、血清假病毒混合物孵育时间、细胞板培养时间进行优化调整，最终大大提高了每次实验样本的通量，缩短了试验操作时间，特异性、精密度、线性范围、检测限、耐用性等性能较好；可配合机器稀释、转板以及读板的自动化过程。

权利要求

1.一种非诊断目的的HPV中和抗体的高通量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：将待测样本在96孔板中稀释后转板至384孔板，96孔板中的一孔转移至384孔板中的两复孔，加入HPV假病毒，孵育，离心，接种细胞；

步骤2：在384孔板中设置添加HPV假病毒和细胞的病毒对照孔，以及添加细胞的细胞对照孔；

步骤3：将经过步骤1～2处理的384孔板进行培养，经读板仪检测，分别获得样本检测值、病毒对照值和细胞对照值；

步骤4：计算感染抑制率(％)＝1-(样本检测值-细胞对照值)/(病毒对照值-细胞对照值)×100％；以待测样本的稀释倍数为X，以对应的感染抑制率为Y，用Reed-Muench法获得所述待测样本的中和滴度ID50。

2.根据权利要求1所述的高通量检测方法，其特征在于，步骤1中所述稀释的倍数为10～40960倍。

3.根据权利要求1所述的高通量检测方法，其特征在于，步骤1～2中所述细胞的接种密度为7.5×10²～1.2×10⁴个/孔。

4.根据权利要求1所述的高通量检测方法，其特征在于，步骤1～2中所述假病毒在添加之前用稀释液进行稀释，所述假病毒接种量为200点/孔；

所述稀释液为含1％双抗、1％L-谷氨酰胺、1％非必需氨基酸和10％FBS的DMEM完全培养基。

5.根据权利要求1所述的高通量检测方法，其特征在于，步骤1中所述孵育的时间为0.5～2小时。

6.根据权利要求1所述的高通量检测方法，其特征在于，步骤1中所述稀释的稀释液为含1％双抗、1％L-谷氨酰胺、1％非必需氨基酸和10％FBS的DMEM完全培养基。